ADH，使用犬抗利尿激素ELISA試劑盒需要注意什么？

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被犬抗利尿激素（ADH）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的犬抗利尿激素（ADH）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

1.  檢測(cè)范圍：1 pg/mL – 32 pg/mL。

2.  靈敏度：檢測(cè)濃度小于0.1 pg/mL。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。

 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15%

犬抗利尿激素（ADH）ELISA試劑盒的工作原理基于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）技術(shù)，具體流程如下：

1. ?固相抗原包被?

微孔板預(yù)先包被與犬ADH結(jié)構(gòu)相似的抗原（可能為重組ADH或合成多肽）?27。該抗原通過(guò)物理吸附固定在孔板表面，保留免疫學(xué)活性?46。

2. ?競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合反應(yīng)?

• ?樣品/標(biāo)準(zhǔn)品處理?：待測(cè)犬樣本（如血清、血漿）中的ADH與生物素標(biāo)記的ADH類(lèi)似物同時(shí)加入孔板?78。

• ?競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合?：樣本中的天然ADH與生物素標(biāo)記的ADH競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合孔板中有限的ADH特異性抗體結(jié)合位點(diǎn)?37。ADH濃度越高，與抗體結(jié)合的生物素標(biāo)記ADH越少，形成競(jìng)爭(zhēng)性抑制關(guān)系?38。

3. ?洗滌與信號(hào)放大?

• ?去除未結(jié)合物質(zhì)?：洗滌去除未結(jié)合的游離ADH和抗體復(fù)合物?46。

• ?酶標(biāo)二抗結(jié)合?：加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素，與生物素標(biāo)記的ADH-抗體復(fù)合物結(jié)合?38。

4. ?顯色與定量分析?

• ?底物反應(yīng)?：加入TMB顯色底物，HRP催化底物生成藍(lán)色產(chǎn)物，反應(yīng)終止后變?yōu)辄S色?46。

• ?濃度計(jì)算?：通過(guò)檢測(cè)450 nm波長(zhǎng)下的吸光度值，吸光度與樣本中ADH濃度呈負(fù)相關(guān)（即ADH濃度越高，顯色越淺）?37。標(biāo)準(zhǔn)曲線法可精確計(jì)算ADH濃度?38。

?技術(shù)特點(diǎn)?

• ?檢測(cè)范圍?：通常覆蓋pg/ml級(jí)別（如0.781-50 pg/ml），靈敏度高?37。

• ?特異性?：依賴抗體對(duì)ADH的特異性識(shí)別，可排除其他類(lèi)似結(jié)構(gòu)干擾?27。

• ?應(yīng)用場(chǎng)景?：適用于犬體液樣本中ADH的定量檢測(cè)，用于研究水電解質(zhì)平衡、腎功能異常等?

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