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ADH,使用犬抗利尿激素ELISA試劑盒需要注意什么?

更新時間:2025-04-16      瀏覽次數(shù):320

ADH,使用犬抗利尿激素ELISA試劑盒需要注意什么?

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被犬抗利尿激素(ADH)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的犬抗利尿激素(ADH)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。


1.  檢測范圍1 pg/mL  32 pg/mL。

2.  靈敏度:檢測濃度小于0.1 pg/mL

3.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

 重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15%

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犬抗利尿激素(ADH)ELISA試劑盒的工作原理基于酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)技術(shù),具體流程如下:

1. ?固相抗原包被?

微孔板預(yù)先包被與犬ADH結(jié)構(gòu)相似的抗原(可能為重組ADH或合成多肽)?27。該抗原通過物理吸附固定在孔板表面,保留免疫學活性?46。

2. ?競爭性結(jié)合反應(yīng)?

  • ?樣品/標準品處理?:待測犬樣本(如血清、血漿)中的ADH與生物素標記的ADH類似物同時加入孔板?78。

  • ?競爭結(jié)合?:樣本中的天然ADH與生物素標記的ADH競爭結(jié)合孔板中有限的ADH特異性抗體結(jié)合位點?37。ADH濃度越高,與抗體結(jié)合的生物素標記ADH越少,形成競爭性抑制關(guān)系?38

3. ?洗滌與信號放大?

  • ?去除未結(jié)合物質(zhì)?:洗滌去除未結(jié)合的游離ADH和抗體復(fù)合物?46。

  • ?酶標二抗結(jié)合?:加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的鏈霉親和素,與生物素標記的ADH-抗體復(fù)合物結(jié)合?38

4. ?顯色與定量分析?

  • ?底物反應(yīng)?:加入TMB顯色底物,HRP催化底物生成藍色產(chǎn)物,反應(yīng)終止后變?yōu)辄S色?46。

  • ?濃度計算?:通過檢測450 nm波長下的吸光度值,吸光度與樣本中ADH濃度呈負相關(guān)(即ADH濃度越高,顯色越淺)?37。標準曲線法可精確計算ADH濃度?38。


?技術(shù)特點?

  • ?檢測范圍?:通常覆蓋pg/ml級別(如0.781-50 pg/ml),靈敏度高?37

  • ?特異性?:依賴抗體對ADH的特異性識別,可排除其他類似結(jié)構(gòu)干擾?27。

  • ?應(yīng)用場景?:適用于犬體液樣本中ADH的定量檢測,用于研究水電解質(zhì)平衡、腎功能異常等?






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